Odgovori na postavljena pitanja - Biologija
Rod Lactobacillus spada u 19. grupu (pravilni, nesporogeni Gram-pozitivni štapići) Bergey-evog priručnika za determinativnu bakteriologiju (1). Stanice
su štapićaste, širine 0,5-1,2 mm i dužine 1,0-10,0 mm (Slika 1). Često se nalaze u kratkim lancima. Rijetko su pokretne zahvaljujući peritrihnim falgelama.
Fakultativni su anaerobi, ponekad mikroaerofilni, rastu slabo na zraku ali dobro kod smanjene dostupnosti kisika. Rast se pospješuje kod uzgoja u atmosferi
obogaćenoj sa 5% CO2. Optimalna temperatura rasta kreće se od 30 do 40 °C.
Kolonije u Petrijevoj zdjelici na agaru su promjera 2-5 mm, konveksne, neprozirne, bez sjaja i pigmenta (Slika 2).
Kemoautotrofi su, zahtijevaju kompleksne i bogate medije. Metabolizam im je fermentativan i saharolitički (fermentacija saharoze), a barem polovica završnih
produkata metabolizma ugljika je laktat. Važnije biokemijske osobine su: ne reduciraju nitrate, ne razgrađuju želatinu, katalaza i oksidaza su negativni.
Bakterije roda Lactobacillus su široko rasprostranjene u okolišu, posebno u namirnicama životinjskog i biljnog porijekla. Normalno nastanjuju gastrointestinalni
trakt ptica i sisavaca i vaginu sisavaca. Vrlo rijetko su patogeni.
L. sporogens je nepatogena i korisna bakterija. Koristi se kao probiotik koji pomaže rast prirodne bakterijske mikroflore i njeno održavanje u intestinalnom
traktu. Daje se oralno u obliku kapsula kućnim ljubimcima (npr. Pet Med) i čovjeku (npr. Pro-life). Novija istraživanja (2) su pokazala da se L. sporogens
može primjenjivati u profilaksi i liječenju dijareje uzrokovane antibioticima kod djece.
Mehanizam djelovanja L. sporogens temelji se na produkciji mliječne kiseline u crijevu, čime se stimulira crijevna peristaltika i potiče probava, te
održava pH vrijednost. Mliječna kiselina pomaže održavanju normalne mikroflore kroz zaustavljanje rasta bakterija koje su osjetljive prema kiselinama i mogu
proliferirati samo kod više pH vrijednosti, kad produciraju različite toksične tvari i uzrokuju akutni ili kronični enteritis, dijareju ili opstipaciju. Kolonizacijom L.
sporogens u intestinalnom traktu zaustavlja se rast štetnih bakterija koje su već prisutne i sprečava njihova buduća kolonizacija. Kao posljedica smanjene
količine plina koji nastaje kod probave, smanjuje se nadutost.
Odgovori na pitanja:
Nakon suspendiranja kemikalija u destiliranoj vodi pH otopine se namjesti na 6,0-6,5 sa 1 M NaOH i 1 M HCl. Podloga se sterilizira autoklaviranjem (15 min na
118 °C). Kod nacjepljivanja materijala preporuča se metoda izlijevanja podloge, tzv. pour plate method (3). Nacijepljene ploče se inkubiraju kroz 3 dana
na 35 °C. Preporuča se inkubacija u anaerobnoj komori u atmosferi obogaćenoj sa CO2. Tijekom pripreme i inkubacije površina ploča se ne
smije osušiti, jer dolazi do koncentracije acetata na površini što inhibira rast laktobacila. Podloga je slabo selektivna, te mogu porasti i druge vrste bakterija.
Zbog specifičnih faktora rasta i bogate hranjive baze ne preporučaju se pokušaji uzgoja L. sporogens na podlogama od kućnih materijala.
Kemikalija
Količina
Pepton iz kazeina
10.00 g
Mesni ekstrakt
10.00 g
Kvašćev ekstrakt
5.00 g
D-Glukoza
20.00 g
Tween® 80
1.00 g
K2HPO4
2.00 g
Na-acetat
5.00 g
(NH4)2 - citrat
2.00 g
MgSO4 x 7 H2O
0.20 g
MnSO4 x H2O
0.05 g
Agar
14.0 g
Destilirana voda
1000.0 mL
LITERATURA
(1) J. G. Holt, N. R. Krieg, P. H. A. Sneath, J. T. Staley, S. T. Williams: Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, Williams and Wilkins, Baltimore,
(1994) p. 787.
(2) M. La Rosa, G. Bottaro, N. Gulino, F. Gambuzza, F. Di Forti, E. Tornambe: Prevention of antibiotic-associated diarrhea with Lactobacillus sporogens and
fructo-oligosaccharides in children. A multicentric double-blind vs placebo study. Minerva Pediatr 55 (2003) 447-452.
(3) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 18th Ed. APHA, New York (1992).
SLIKE
Slika 1 Kolonije Lactobacillus sp. Porasle na MRS agaru | |
Slika 2 Stanice Lactobacillus sp. Obojene po Gramu |
dr. sc. Jasna Hrenović
asistent na Katedri za mikrobiologiju Botaničkog zavoda Biološkog odsjeka
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb